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Test ELISA
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Video Source: www.youtube.com/watch?v=yjKymRt8FPQ
Test réalisé le 21/01/2016 dans le cadre d'un TPE. • Lien du TPE : http://sidatpe68.weebly.com • Le principe • Le test ELISA est un test immunologique classiquement utilisé pour la détection et le dosage protéique. C'est aussi l'une des 2 techniques utilisées lors du dépistage du virus du SIDA • Au cours de ce TP, vous allez rechercher la présence d'Ac anti-BSA dans un sérum à l'aide d'un support tapissé de BSA et d'un Ac anti-anticorps BSA couplé à la péroxydase qui colore son substrat en bleu lors de la formation du complexe enzyme-substrat. • • Le protocole • 1. Incubation des solutions à tester : • avec un compte goutte, déposer dans chaque puits • puits 1 : 2 gouttes eau distillée • puits 2 : 2 gouttes de solution d'AC anti-BSA C1 • puits 3 : 2 gouttes de sérum A à tester C2 • puits 4 : 2 gouttes de sérum B à tester C3 • Incuber 15 ' à température ambiante. • 2. Lavage • vider les cupules par retournement : attention de ne pas contaminer les puits voisins • laver 2 X avec le PBS tween en remplissant les cupules sans déborder • tapoter sur papier absorbant • 3. Incubation de la solution d'anticorps de détection • ajouter 2 gouttes de la solution d'Ac de détection dans chaque puits • incuber 15' à température ambiante • 4. Lavage • laver 2 X ; répéter à l'identique l'étape 2. • 5. Révélation • déposer dans chaque puits 2 gouttes de TMB • laisser incuber 5' à température ambiante • 6. Résultats • observer les colorations obtenues dans chaque puits.
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